微生物学诊断包括病料直接抹片镜检、病原体的分离鉴定和试验动物接种等。
进行微生物学诊断时，病料的采取具有决定性的意义。病料采取不当，不但不能检出该病的真正病原体，而且可能由于病料污染别的病原体而造成误诊。因此，应根据不同的疾病采取不同的病料，而且应尽可能以无菌操作采取。一般而言，当疾病为全身性的或处开菌血症（或病毒血症）阶段时，从心、肝、脾、脑了取材较为适宜。局部发病时，则应从有肉眼可见病变的组织器官取材。无论什么疾病，作为病原分离的病料，应该在疾病流行的早期还未进行过药物治疗的病鸭中取材，因为后期的病鸭，或者经药物治疗的病鸭，虽然在一定程度上还表现出某些症状和病变，但常难以分离出病原体。当然，也有某些疾病的流行后期，甚至在症状或病变消失后仍然可以分离出病原，这就是所谓带菌（带病毒）者。对于可以成为带菌（带病毒）者的疾病，可以从带菌（带病毒）的病鸭采取病料分离病原体，但一般其分离的百分率也远不如流行期高。对于某些疾病，把剔除皮肤、肌肉及脂肪的长骨作为病料，不但容易保存和运输，污染机会少，而且病原体在骨髓中的存活时间也比在其他器官组织中的存活时间长，因而容易分离到真正的病原体。
病料采取后应盛于灭菌的器皿中，一般应在低温条件下运送和保存，以减少病原体的死亡，也可抑制污染菌的生长。
1.病料直接抹片镜检 通常用有明显病变的组织器官或心血抹片，待自然干燥固定后，用革兰氏、瑞氏或姬姆萨氏法染色，然后镜检，以发现各种病原细菌（包括螺旋体、霉形体及真菌）。
2.病原体的分离和鉴定 根据各种病原微生物的不同特性，选择最适宜的培养基进行接种培养。
一般细菌，可用普通琼脂培养基、肉汤培养基及血液琼指培养基。真菌、螺旋体以及某些有特殊要求的细菌，则用特殊培养基。接种后，置于37度恒温箱内培养，厌氧菌可用蜡烛缸或其他设备进行厌气培养。
病毒的分离，可接种于健康鸡胚或鸭胚，也可接种于活的器官和组织细胞上培养。鸡胚或鸭胚的接种途径根据病毒的性质而定，一般呼吸道感染的病毒，接种于尿囊腔或羊膜腔；嗜皮肤内或绒毛尿囊膜。胚龄的大小取决于接种途径，一般以9~11日龄为宜。胚龄太大，如超过15日龄，由于卵黄被利用，往往在鸡胚液中出现母源性的抗体，抑制相应病毒的生长繁殖，必须注意。为避免接种材料被细菌污染，一般可于病料经研磨制成悬浮液并离心沉定后，加入适量的抑菌药物，如青霉素、链毒素每毫升各5000~10000国际单位，在温度4度冰箱中感作约4小时。
病毒材料接种于鸡胚、鸭胚或器官培养或细胞培养，一定时间后即引起被接种对象的异常或死亡。
分离得到的细菌或病毒纯培养物，尚需用各种方法作进一步的鉴定。
3.试验动物接种 试验动物接种是病原微生物分离和鉴定的一种重要方法。当病料受到比较严惩的污染需要提纯，或由于病料在运输、保存过程中病原体大量死亡、残存数量较少而需要增殖，或获得的病原体经纯培养后，需要最后证实是否是引起该病的病原物，均可采用动物接种的方法。所接种的动物，一般选择对该病原体最敏感的动物，但作病原鉴定时，往往还接种其他一些实验动物。
试验动物园接种途径视病原微生物的种类而异，能引起全身性疾病或菌血症（病毒血症）的，一般采用皮下、肌肉或静脉内接种；呼吸系统疾病的，进行气管内、腭裂内或滴眼、滴鼻接种；消化道感染的疾病，则可灌服或通过饲料、饮水口服接种。此外，还可根据具体疾病的特点，采用腹腔内注射、脑内注射、皮内注射、皮肤刺种、脚垫刺种、泄殖腔涂擦、羽毛囊涂擦等接种方法。
试验动物接种后，应详细观察和记录。发病及死亡的动物应逐只剖检，必要时还应进行病原体的分离。
|
